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Defensa de la Tesis Doctoral codirigida en el SERIDA "Cellular Basis and Optimization of Cryopreservacion Survival of Bull Sperm". Universidad de León, 2020.


Amer Salman defendió la Tesis Doctoral Cellular Basis and Optimization of Cryopreservation Survival of Bull Sperm (Bases celulares y optimización de la supervivencia de la criopreservación de semen de toro) el pasado 18 de septiembre, a través de videoconferencia, organizada por la Facultad de Ciencias Biológicas y Ambientales de la Universidad de León.

La tesis fue codirigida por José Néstor Caamaño Gualdoni, investigador del Área de Selección y Reproducción Animal del SERIDA y por Felipe Martínez-Pastor, del Instituto de Desarrollo Ganadero y Sanidad Animal (INDEGSAL) de la Universidad de León.
 

Resumen
La inseminación artificial con semen congelado es una herramienta indispensable en el manejo del ganado en todo el mundo. Aunque los protocolos para la criopreservación de semen de toros están bien establecidos, se requieren más investigaciones y mejoras para resolver varios problemas que causan una disminución en la calidad del semen y en su fertilidad después de la descongelación. El objetivo principal de esta tesis es mejorar los protocolos de crioconservación para el semen de toro.

Se han realizado varios experimentos utilizando toros de Asturiana de los Valles, una raza de ganado autóctono español y también toros de la raza Holstein. En todos los experimentos de esta tesis el semen se evaluó directamente después de la descongelación y después de cinco horas de incubación por el sistema CASA (Computer-Assisted Sperm Analisis) y por citometría de flujo (viabilidad, integridad del acrosoma, capacitación, apoptosis, determinación del potencial de membrana mitocondrial, producción de especies de oxígeno reactivo citoplasmático (ROS) y superóxido mitocondrial, e integridad del ADN).

En el primer experimento se evaluó el impacto de extender el tiempo de equilibrado de 4 h a 24 h utilizando los diluyentes BIOXcell y OPTIXcell sobre la calidad del semen de toro después de la descongelación. Además, se incluyó la adición de 2 mM de glutatión (GSH) al diluyente de congelación de semen. La extensión del tiempo de equilibrado en ambos diluyentes redujo la motilidad de los espermatozoides después de la descongelación, aunque mejoró su viabilidad. La adición de glutatión redujo ligeramente el superóxido mitocondrial.

En el segundo y tercer experimento se utilizaron antioxidantes no enzimáticos como: curcumina, crocina y glutatión y el crioprotector trehalosa en el diluyente de congelación BIOXcell con el objetivo de mejorar la calidad del semen después de la descongelación. Los resultados mostraron una reducción en la calidad del semen después de la descongelación cuando se suplementó con trehalosa a 50 mM y, especialmente, 100 mM. La trehalosa resultó en un ligero efecto antioxidante, reduciendo ROS. El glutatión disminuyó la producción del anión superóxido mitocondrial. Sin embargo, GSH no mejoró la calidad del esperma después de la descongelación. A su vez, la curcumina y la crocina tampoco mejoraron la calidad del semen.

El objetivo del cuarto experimento fue probar el efecto de la centrifugación en coloide de capa única (SLC) y de capa doble (DLC), durante la precongelación en semen de toro para mejorar la calidad tras la descongelación. Se utilizó el coloide comercial BoviPure con este fin y el experimento se realizó con semen de toros de la raza Holstein-Friesian. Los resultados confirmaron que tanto el SLC como el DLC mejoraron la motilidad y los parámetros fisiológicos de los espermatozoides después de la descongelación comparado con el grupo control. También redujeron la fragmentación del DNA espermático. Por lo tanto, podemos concluir que SLC podría ser adecuado para el uso práctico en centros de inseminación, siendo más barato y más fácil de realizar.


Villaviciosa, 2 de noviembre de 2020

 

 

 


 

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