Resultado Proyecto

La monta natural como vía de transmisión de la neosporosis bovina. Experimentación en campo

Referencia: RTA2006-00086-C02-01. Organismo financiador: Instituto Nacional de Investigación y Tecnología Agraria y Alimentaria. Importe: 98.986 €. Duración: 2006-2009.

Equipo investigador

Koldo Osoro Otaduy SERIDA
Carolina Tamargo Miguel SERIDA
Carlos Olegario Hidalgo Ordóñez SERIDA
Antonio Martínez Martínez SERIDA
Ignacio Ferre Pérez Universidad Complutense de Madrid
Antonio Rodríguez Bertos Universidad Complutense de Madrid
Raquel Atxaerandio Galdós NEIKER- Instituto Vasco de Investigación y Desarrollo Agrario

Avance de resultados

Cinética de distribución y localización de Neospora caninum en el aparato genital de sementales bovinos infectados experimentalmente

Las edades de los añojos en el momento del sacrificio (30/10/07 al 09/01/08) oscilaron entre los 18 y los 23 meses y los pesos vivos entre los 540 y 700 kg (Tabla 1). Los incrementos medios diarios de los añojos infectados variaron entre los 1,54 kg/día del primer grupo y los 1,04 y 0,99 de los dos últimos grupos de sacrificio. Estos crecimientos de los añojos en fase de acabado son normales. Las menores ganancias de los dos últimos grupos sacrificados responden a un estado más avanzado (engrosamiento) en la fase de acabado. Las ganancias de los no infectados o testigos, también, fueron superiores en los primeros grupos que se sacrificaron frente a los últimos: 1,29 (primer grupo) vs. 1,09 kg/día (último grupo) (Tabla 1).

Tabla 1. Edades, pesos y ganancias diarias de los animales experimentales: infectados y controles (pv: peso vivo).

Nº	Fecha	Semana	Infectado			no Infectado
Sacrificio	Sacrificio	Post-infec.	Edad	Peso	Ganancia	Edad	Peso	Ganancia
			(Meses)	(Kg)	(kg pv/día)	(Meses)	(Kg)	(kg pv/día)
1	30/10/2007	1	19,4	620	1,54	21,2	546	1,29
2	06/11/2007	2	21,4	651	1,21	18,3	600	1,90
3	14/11/2007	3	21,8	652	1,26	21	624	1,40
4	21/11/2007	4	20,6	698	1,38	19,7	620	1,46
5	28/11/2007	5	19,3	645	1,25	19,5	674	1,67
6	12/12/2007	7	22,2	647	1,04	22,4	653	1,33
7	09/01/2008	11	22,6	651	0,99	20,8	670	1,09
Media grupos			21,0	652	1,24	20,4	627	1,45

Respuesta de IgG séricas

Por lo que se refiere al control efectuado de las IgG séricas, cabe señalar que en los toros infectados se observó un incremento de los valores séricos de IgG anti-N. caninum. Los animales testigo permanecieron seronegativos durante todo el experimento (Tabla 2).

Tabla 2. Respuesta sérica a N. caninum.

D	ESTADO	TORO	FECHA SACRIFICIO 29/10/07	05/11/07	13/11/07	20/11/07	27/11/07	11/12/07	08/01/08
	INFECTADO	2344	0,124
7	TESTIGO	2399	1,432
	I	74	0,839
	I	8238	3,168
	I	8066	3,412	24,469
14	I	1419	1,040	13,858
	T	9950	0,143	0,416
	I	78	-0,375	24,428
	I	1446	0,333	17,312	41,233
22	I	1248	2,871	22,014	43,430
	T	6126	0,916	-0,250	-0,333
	I	3984	2,788	22,139	42,762
	T	9664	0,483	0,403	0,176	0,780
29	I	1684	-0,333	17,395	42,666	54,754
	I	138	4,786	20,516	22,265	50,932
	I	79	3,912	13,109	41,806	51,457
	I	9317	3,038	15,397	59,102	49,737	48,829
36	T	2422	0,065	0,990	0,316	0,964	0,312
	I	1881	0,707	21,515	41,949	41,710	47,157
	I	3985	2,414	11,694	36,025	18,634	30,148
	I	1405	1,759	12,401	33,779	40,946	42,284	45,528
41	T	1683	-1,040	-0,375	-0,666	8,839	10,368	-1,041
	I	5391	2,887	25,052	55,853	45,151	44,912	61,808
	I	1449	1,332	3,870	29,766	42,093	52,938	50,024
	T	4436	0,291	-0,999	3,966	3,488	5,829	-0,947	-0,379
78	I	1244	0,982	19,060	34,591	48,256	54,181	75,390	87,885
	I	3595	1,998	20,433	31,868	29,861	44,482	37,246	32,655
	I	3358	1,498	20,141	51,648	46,011	43,383	69,948	87,979

D: Día de sacrificio post-infección; I: infectado; T: testigo.

Detección de ADN de N. caninum en el aparato genital

Se ha extraído el ADN de todas las muestras y se puede avanzar la detección de ADN de N. caninum en algunas de ellas del aparato genital de los sementales sacrificados, especialmente en testículo y epidídimo.

Estudio histopatológico

Es destacable la presencia de infiltrados inflamatorios crónicos perivasculares del intersticio testicular, que provocan la degeneración del túbulo seminífero con descamación de las células germinales y presencia de células macrofágicas multinucleadas. Además, estos focos inflamatorios crónicos, también, se pudieron observar en el epidídimo y próstata, llegando en algunos casos, a formar folículos linfoides secundarios. Estas lesiones presentan una tendencia más marcada en los últimos animales sacrificados. Otras lesiones que pudieron apreciarse, esporádicamente, fueron pericarditis y miocarditis multifocal linfocítica, sobre todo en las primeras semanas del experimento. En el sistema nervioso central se pudieron apreciar pequeñas infiltraciones de células redondas en meninges, formando manguitos linfocíticos perivasculares, más evidentes en los animales de los últimos grupos.

Localización del parásito (Hibridación in situ)

Para la puesta a punto del método, se han empleado muestras de cerebro incluidas en parafina procedentes de un ratón infectado con N. caninum y de un testigo negativo. Se han probado varias condiciones para la digestión del tejido con proteinasa K, la temperatura de desnaturalización y la concentración de la sonda. Aunque el procedimiento aún no está optimizado, conviene resaltar que se han establecido importantes aspectos del protocolo, como la obtención de la sonda marcada con digoxigenina, el tratamiento con proteinasa K y la desnaturalización de la secuencia diana. Sin embargo, queda por estudiar la posible utilización de la sonda de hebra sencilla frente a la doble.

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