Resultado Proyecto
Valoración no invasiva de la viabilidad de ovocitos de especies domésticas por Microscopia de Luz Polarizada
Referencia: RZ2007-00013-00-00. Organismo financiador: Instituto Nacional de Investigación y Tecnología Agraria y Alimentaria. Importe: 38.461 €. Duración: 2007-2010.
Equipo investigador
José Néstor Caamaño Gualdoni. SERIDA
Enrique Gómez Piñeiro. SERIDA
Carmen Díez Monforte. SERIDA
Marta Muñoz Llamosas. SERIDA
Emilio Martínez García. Universidad de Murcia
María Antonia Gil Corbalán. Universidad de Murcia
Cristina Cuello Medina. Universidad de Murcia
Entidades Colaboradoras
Laboratorio de Fertilización In Vitro. Facultad de Veterinaria de la Universidad Autónoma de Barcelona.
Facultad de Veterinaria. Departamento de Medicina y Cirugía Animal. Universidad de Murcia.
Avance de resultados
Los resultados más relevantes son los siguientes:
Objetivo 1
Evaluar la aptitud de la microscopia de luz polarizada (MLP) para determinar el estado de maduración de ovocitos madurados in vitro en las especies bovina, porcina, ovina y caprina.
Se logró poner a punto la técnica de inmunocitoquímica para la detección del huso meiótico en ovocitos bovinos y porcinos. Se realizaron pruebas preliminares de dosis respuesta con el anticuerpo primario (anticuerpo monoclonal anti-α-tubulina – Sigma T6074) y secundario (Alexa Fluor 488 - goat anti-mouse IgG) para determinar las concentraciones óptimas.
- Bovino: Se detectó por MLP una estructura que se clasificó como posible huso meiótico; a continuación, los ovocitos fueron procesados por inmunocitoquímica para determinar la presencia efectiva del huso meiótico. Se determinó que había una correlación positiva (r=1; p<0,0001) entre la señal obtenida por MLP y la presencia de microtúbulos polimerizados (Figuras 1 y 2).
- Porcino: Se establecieron las concentraciones óptimas de anticuerpos.
Objetivo 2
Evaluar el uso de la microscopia de luz polarizada para determinar la viabilidad de ovocitos madurados in vitro en las especies bovina y porcina.
- Bovino: Los ovocitos expuestos a la MLP no muestran diferencias estadísticamente significativas en el desarrollo embrionario si se comparan con ovocitos no expuestos. Además, el número de células de la masa celular interna, trofoectodermo y totales no son diferentes entre los dos grupos.
- Porcino: Se implementaron las técnicas de fertilización in vitro y cultivo de embriones con la ayuda del equipo de investigación de la Universidad de Murcia, el cual facilitó el semen congelado para realizar las experiencias.
Figura 1. Ovocito bovino madurado in vitro expuesto a Microscopia de Luz Polarizada
Figura 2. Ovocito bovino con un huso meiótico típico – Inmunocitoquímica