Equipo investigador
Isabel Márquez Llano-Ponte SERIDA
José Miguel Prieto Martín SERIDA
Rosa Casais Goyos SERIDA
Ana Del Cerro Arrieta SERIDA
José Luis Múzquiz Moracho Universidad de Zaragoza
Entidad Colaboradora
Facultad de Veterinaria de la Universidad de Zaragoza
El objetivo principal del proyecto es encontrar nuevas vías para el tratamiento de infecciones sistémicas en acuicultura, particularmente frente a tres importantes bacteriosis que afectan a salmónidos tanto de cultivo como de poblaciones salvajes: lactococosis (Lactococus garvieae) , síndrome del alevín (Flavobacterium psycrophilum) y forunculosis (Aeromonas salmonicida).
Durante el año 2007 se ha continuado con la conservación y almacenamiento de las cepas aisladas a partir de los brotes infecciosos ocurridos en este período. Todas las cepas aisladas fueron conservadas a -20 ºC en 15% de glicerol y a -80 ºC en Crioteca ® skim milk para su posterior análisis. Así mismo, se continuó con la tipificación de cepas mediante PFGE de A. salmonicida y se puso a punto un método PFGE para F. psychrophilum y las bacterias probióticas utilizadas en los ensayos “in vivo”. Para ello, se evaluaron diferentes protocolos de preparación de las muestras, hasta 16 enzimas de restricción y diferentes condiciones de electroforesis.
Se realizó la tipificación molecular de las cepas de F. psychrophilum recogidas hasta el momento, mediante la amplificación de secuencias aleatorias y universales (RAPD) y la electroforesis en campo pulsante (PFGE).
La tipificación con los iniciadores R03 y R05 únicamente consiguió diferenciar 4 y 3 RAPD-tipos, respectivamente. En el caso del iniciador R03, tres de las cepas aisladas en Asturias y Aragón se encontraban agrupadas en el grupo genómico I, mientras que el resto, incluida la cepa de referencia NCIMB 1947, pertenecían al grupo genómico II. En cuanto al iniciador R05, todas las cepas procedentes de brotes fueron agrupadas en el mismo grupo genómico con un índice de similitud, según el coeficiente de Dice, mayor del 90%.
En cuanto al PFGE, se realizaron ensayos para seleccionar las condiciones metodológicas más apropiadas para F. psychrophilum. De los 16 enzimas de restricción ensayados, los mejores resultados se obtuvieron con StuI, que resultó ser una técnica más discriminatoria que la anterior. También, se realizaron los experimentos para poner a punto los protocolos de PFGE para la tipificación de las bacterias probióticas aisladas durante este proyecto. Las cepas con las que se trabajó fueron ZAR 100 (Lactococcus lactis subsp. lactis), ZAR 102 (Lactococcus lactis subsp. cremoris), ZAR 150 (Lactobacillus curvatus), ZAR 202 (Lactobacillus sakei) y ZAR 8H (Brochothrix thermosphacta).