Resultado Proyecto
Interspecies nuclear transfer
Organismo financiador: Ministerio de Educación y Ciencia. Importe: 8.160 €. Duración: 2006-2007.
Equipo investigador
Enrique Gómez Piñeiro SERIDA
José Néstor Caamaño Gualdoni SERIDA
Carmen Díez Monforte SERIDA
Aída Rodríguez Pérez (Becaria MEC)
Luis Royo Martín SERIDA
María Álvarez Viejo Hospital Central de Asturias
Andras Dinnyes Agricultural Biotechnology Center - Gödollo, Hungría
Szilard Bodo Agricultural Biotechnology Center- Gödollo, Hungría
Resultados y conclusiones
El SERIDA dispone de la tecnología adecuada para desarrollar diversas etapas del proceso de transplante de núcleos, tales como la micromanipulación de ovocitos y embriones, la fusión de núcleos, la activación partenogenética y el cultivo de embriones y células somáticas (Figuras 1 y 2). Por la complejidad de esta tecnología se priorizó el establecimiento de un protocolo de actuación en una especie animal (bovino) para maximizar las posibilidades de lograr los objetivos del establecimiento de esta tecnología. Se realizaron experimentos destinados a obtener información sobre el desarrollo embrionario, el número de células presente en los embriones, la expresión génica y la apoptosis en embriones obtenidos por activación partenogenética.
Figura 1. Enucleación de un ovocito bovino
Figura 2. Transplante de núcleo de un fibroblasto bovino a un ovocito enucleado bovino
Se iniciaron actividades para establecer los parámetros de fusión celular óptimos para realizar la técnica de transplante de núcleos, utilizando fibroblastos bovinos adultos y ovocitos enucleados bovinos.
Se realizó un entrenamiento intensivo para capacitar al personal del SERIDA en la fabricación de microinstrumentos necesarios para realizar las diversas etapas del transplante de núcleos.
También, se efectuaron experimentos de control del ciclo celular en fibroblastos cultivados de bovino y de oso pardo. Dichas actividades dieron como resultado el desarrollo de diversos métodos válidos para el control del ciclo celular (Tabla 1). La evaluación de los fibroblastos por citometría de flujo fue un elemento fundamental para lograr el objetivo. Esta actividad se desarrolló con la colaboración y apoyo de los Servicios Tecnológicos de la Universidad de Oviedo.
Tabla 1. Porcentajes (± SD) de fibroblastos de oso pardo existentes en varias fases del ciclo celular una vez expuestos a diversas condiciones de crecimiento
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Fase del ciclo celular |
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Tratamiento |
G0/G1 |
S |
G2/M |
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70 % Confluencia |
39.6 ± 3.4 a |
35.1 ± 2.3 a |
25.2 ± 4.4 a |
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100 % Confluencia (Contact inhibition) |
87.2 ± 1.0 b |
8.3 ± 2.1 b |
4.4 ± 1.1 b |
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Deprivación de suero |
92.7 ± 0.9 c |
1.7 ± 0.4 c |
5.5 ± 0.8 b |
a,b,c letras diferentes dentro de una columna implica valores significativamente diferentes (P < 0.01)
Se establecieron las bases de la tecnología de transferencia de núcleos. Sin embargo, para alcanzar un alto rendimiento en el uso de la misma se debe profundizar en su desarrollo para lograr la eficiencia que requiere esta tecnología.
Durante el intercambio científico con Hungría se efectuaron dos visitas de científicos de ese país al SERIDA, una de las cuales fue de 5 semanas y sirvió para establecer las bases del trabajo realizado. Posteriormente se efectuó un visita por un miembro del equipo de trabajo del SERIDA al Agricultural Biotechnology Center - Gödollo, Hungría.