Resultado Proyecto
Utilización de semen sexado para la mejora de las biotecnologías reproductivas in vitro en ganado vacuno
Referencia: RTA2008-00082-00-00. Organismo financiador: Instituto Nacional de Investigación y Tecnología Agraria y Alimentaria. Importe: 71.640 €. Duración: 2008-2011.
Equipo investigador
Carmen Díez Monforte. SERIDA
Enrique Gómez Piñeiro. SERIDA
José Néstor Caamaño Gualdoni. SERIDA
Marta Muñoz Llamosas. SERIDA
Fernando Vicente Mainar. SERIDA
Alfredo Castro. Sexing Technologies
David Cran. Sexing Technologies
Richard Lenz. Sexing Technologies
Equipo técnico
Susana Carrocera Costa. SERIDA
Entidades Colaboradoras
Luis José Royo Martín. SERIDA
Alfonso Gutiérrez-Adán. INIA
Sexing Technologies, USA
Avance de resultados
Se abordó el estudio de tres sistemas de cultivo embrionario: a) Monocapa de células Vero en B2 (medio comercial), b) fluido oviductal sintético (SOF) con 10% suero fetal bovino y c) SOF con 6 g/L de albúmina sérica bovina. Hemos constatado la menor capacidad de desarrollo de los embriones producidos con semen sexado para llegar al estadio de blastocisto, con relación a los obtenidos con semen no sexado, e independientemente del sistema de cultivo empleado. No se han detectado diferencias en el desarrollo de los embriones producidos con semen macho o hembra (datos no mostrados), ni en los porcentajes de supervivencia de los mismos tras vitrificación/desvitrificación.
Tras la transferencia de blastocistos (frescos o vitrificados), producidos in vitro con semen sexado, a novillas receptoras del rebaño experimental, se ha detectado que los índices de gestación obtenidos en día 60 fueron del 53% para los embriones transferidos frescos (N=17) y del 50% para los vitrificados (N=10). Estos datos nos permiten confirmar que el laboratorio dispone de un sistema eficaz de producción y criopreservación de embriones producidos in vitro, y que se adapta a las condiciones específicas de trabajo con el semen sexado.
Con el fin de confirmar la eficacia del proceso de separación espermática en origen, hemos desarrollado un procedimiento que permite confirmar el sexo del embrión con 100% de certeza, y que está basado en el empleo de una única pareja de primers de amelogenina para amplificar dos secuencias distintas en el macho y en la hembra. Este sistema está bien establecido en nuestro laboratorio, y muestra una eficacia superior a otras amplificaciones con dos parejas de primers correspondientes al cromosoma Y, y uno somático. Este protocolo nos ha permitido constatar la elevada pureza del semen cedido por nuestro colaborador, Sexing Technologies, medida por las proporciones de blastocistos del sexo deseado (95-97%).
Romina, la primera ternera producida en España con técnicas de fecundación in vitro con semen sexado. © SERIDA