Resultado Proyecto
Enfermedades bacterianas emergentes que afectan a especies con interés agronómico, socio-cultural y paisajístico en el Principado de Asturias
Referencia: RTA2008-00019-00-00. Organismo financiador: Instituto Nacional de Investigación y Tecnología Agraria y Alimentaria. Importe: 68.160 €. Duración: 2008-2011.
Equipo investigador
Ana J. González Fernández. SERIDA
Mª Carmen Mendoza Fernández. Universidad de Oviedo
Mª Rosario Rodicio Rodicio. Universidad de Oviedo (Asesora)
Ana Mª Fernández Sanz. INIA (Becaria)
Mateo San José. Universidad de Oviedo (Becario)
Entidad Colaboradora
Universidad de Oviedo
Avance de resultados
Se aisló P. s. pv. phaseolicola de Sonchus oleraceus, Fumaria sp, Mercurialis annua, Polygonum lapathifolium y Solanum nigrum, lo que constituye una novedad dado que esta especie bacteriana sólo se ha descrito en leguminosas.
Se ha realizado la tipificación bioquímica de E. persicina y de las nuevas cepas de P. s. pv. phaseolicola, entre las que se ha encontrado el biotipo b2 que no estaba presente en Asturias.
Además, se han aislado cepas del b2 que amplifican los fragmentos del cluster de biosíntesis de la faseolotoxina, esto no se había descrito en España aunque sí en cepas de África, América y Asia (Marqués et al, 2000).
Se ha realizado macrorrestricción genómica con la endonucleasa PmeI, seguida de electroforesis en campo pulsante (PGFE), de 57 aislamientos de P. s. pv. phaseolicola, de los que 52 procedían de judía y cinco de malas hierbas. Se encontraron seis perfiles de los que cuatro (p1, p2, p4 y p9) ya habían sido descritos (San José et al., 2010); otros dos son nuevos, p30 y p31, obtenidos ambos de muestras de judía.
Se ha llevado a cabo la ribotipia mediante restricción/hibridación de 57 aislamientos de P. viridiflava procedentes de kiwi, utilizando BglI, SalI, XbaI, PstI, SphI y HindIII. De todas ellas, la que mejores resultados ofrece, tras hibridar con el operón ribosómico, es HindIII por lo que será la que se utilice con todos los aislamientos.
Se ha finalizado la genotipificación de islas de patogenicidad (PAIs) en los aislamientos de P. viridiflava mediante PCR y se ha encontrado que el 21,8% son portadores de T-PAI, mientras que el 78,2% portan S-PAI.
Los plásmidos de P. viridiflava están siendo estudiados mediante clonación-secuenciación, lo que nos ha permitido conocer la secuencia completa del plásmido p1274, en el que se han podido detectar genes que participarían en procesos metabólicos, quimiotaxis y resistencia a la radiación ultravioleta.
Para comprobar la patogenicidad de los aislamientos de P. s. pv. phaseolicola sobre malas hierbas, se tomó como modelo Solanum nigrum (Figura 1). Se ensayaron los aislamientos LPPA 800 y 573, ambos del biotipo b1. Ninguna de las plantas inoculadas mostró síntomas, por lo que podemos decir que P. s. pv. phaseolicola no es patógena en S. nigrum, aunque pueda estar sobre ella como epifita.
Figura 1. Muestra de S. nigrum de la que se aisló P.s. pv. phaseolicola.