Resultado Proyecto

Identificación y análisis funcional de proteínas específicas sintetizadas en el útero bovino durante el desarrollo temprano de embriones machos y hembras

Referencia: AGL2009-10059/GAN. Organismo financiador: Ministerio de Ciencia e Innovación. Importe: 145.200 €. Duración: 2009-2012.

Equipo investigador

Enrique Gómez Piñeiro. SERIDA
José Néstor Caamaño Gualdoni. SERIDA
María del Carmen Díez Monforte. SERIDA
Marta Muñoz Llamosas. SERIDA
Beatriz Trigal Triguero. SERIDA
Silvia Pérez López. HUCA
Jesús Otero Hernández. HUCA
Fernando Corrales. Universidad de Navarra

Equipo técnico

Susana Carrocera Costa. SERIDA
David Martín González. SERIDA

Entidades Colaboradoras

José Manuel Prendes García. Cooperativa de Agricultores de Gijón.
Juan José Pérez Jánez. Cooperativa de Agricultores de Gijón.
Juan Moreno Roa. Sexing Technologies. EEUU.
Alireza Fazeli. Universidad de Sheffield.
Fred Sinowatz. Universidad Ludwig-Maximilian, Munich.

Avance de resultados

Se ha analizado el proteoma del fluido uterino para identificar proteínas que se relacionen con el embrión en función de su sexo y de su estadio de desarrollo. En el día 5 de gestación se transfirieron a receptoras embriones producidos in vitro, los cuales se recogieron el día 8. Junto con los embriones, el fluido muestreado se compara con su homólogo recogido en un ciclo en que la misma vaca no contenía embriones. Mediante electroforesis diferencial bidimensional (2D-DiGE) acoplada a espectrometría de masas, se detectaron 50 “spots” de proteínas, entre las cuales se identificaron 43 con una alta significación. El análisis funcional produjo dos rutas metabólicas, que integraron a 35 de las proteínas detectadas, las cuales explicaron, por primera vez en bovino, un funcionamiento similar al que ocurre en el entorno de la implantación en especies que, contrariamente a los rumiantes, no presentan implantación diferida (ratón, humano y porcino). La primera ruta mostró la activación del factor nuclear Kappa-B, mientras que la segunda explica la liberación del inhibidor de NFkB. En conjunto, ambas rutas explican cómo el blastocisto bovino resuelve en su favor la respuesta proinflamatoria del útero, que se acompaña de un aumento de la expresión de factores de crecimiento potencialmente beneficiosos para el embrión (C3, HDGF –Hepatoma Derived Growth Factor, y otros), factores antioxidativos (Peroxirredoxinas 1 y 2) y proteínas anti-estrés (HSP-70), junto a otras proteínas que se están analizando y valorando para mejorar los cultivos de embriones bovinos in vitro. La validación de entre 5 y 7 de las proteínas encontradas se realiza con anticuerpos específicos en el fluido uterino y también mediante Western Blot, contrastando embriones producidos in vitro contra embriones recogidos del animal vivo.

Corte histológico de un útero bovino