Resultado Proyecto

Aplicabilidad del método de “alta presión hidrostática” (HHP) en la mejora de la congelabilidad de ovocitos y embriones bovinos producidos in vitro con semen sexado

Referencia: RZ2008-00014. Organismo financiador: Instituto Nacional de Investigación y Tecnología Agraria y Alimentaria . Importe: 66.000 €. Duración: 2008-2011.

Equipo investigador

Carmen Díez Monforte. SERIDA
Enrique Gómez Piñeiro. SERIDA
Marta Muñoz Llamosas. SERIDA
Paloma Duque Álvarez. CEFIVA
Carlos Ochoa García del Fresno. CEFIVA

Equipo técnico

Susana Carrocera Costa SERIDA

Entidades Colaboradoras

Luis José Royo Martín. SERIDA
Csaba Pribenszky. Department of Animal Husbandry and Genetics, Faculty of Veterinary Sciences of Budapest (Hungría)

Avance de resultados

Los experimentos realizados nos han permitido confirmar que el tratamiento de alta presión hidrostática (HHP) no afecta la capacidad de desarrollo del ovocito que, tras fecundación y cultivo in vitro, dio lugar a embriones en similares porcentajes que los ovocitos control no tratados. Además, dichos embriones tuvieron un número de células comparable. Sin embargo, el tratamiento de HHP no mejoró la supervivencia de los ovocitos a la vitrificación, ni modificó los niveles de HSP-70 y HSP-90 (Heat Shock Proteins, HSP).

Por su parte, grupos de blastocistos de días 7 y 8 producidos in vitro se sometieron al tratamiento de HHP, a una presión de 60 MPa, durante 1 hora a 32º C. Se ensayaron dos tiempos de recuperación post-tratamiento: 1 h y 2 h (incubación de los embriones tratados en fluido oviductal sintético –SOF- + 6g/L de albúmina sérica bovina –BSA-). A continuación, los embriones se vitrificaron por el método de fiberplugs. De esta forma, se constituyeron los siguientes grupos experimentales:

• Embriones no tratados y vitrificados (control)
• Embriones sometidos a tratamiento HHP incubados durante 1 h en SOF+BSA y vitrificados
• Embriones sometidos a tratamiento HHP incubados durante 2 h en SOF+BSA y vitrificados
• Embriones sometidos a las condiciones ambientales en que se realiza el tratamiento HHP (cargados en pajuela en medio de mantenimiento, a 32º C y 1 h de tiempo de recuperación) pero no sometidos al tratamiento y vitrificados
• Embriones sometidos a las condiciones ambientales en que se realiza el tratamiento HHP (cargados en pajuela en medio de mantenimiento, a 32º C y 2 h de tiempo de recuperación) pero no sometidos al tratamiento y vitrificados

Tras la desvitrificación, se evaluó la supervivencia de los embriones a las 24 y 48 h, y se realizó una tinción diferencial de los embriones eclosionados.

Los resultados obtenidos (datos preliminares) no muestran un efecto significativo del tratamiento HHP sobre la supervivencia embrionaria post-desvitrificación. Los análisis de Western Blot previos apuntan, al igual que en el caso de los ovocitos, a que el tratamiento de presión no se traduce en una modificación de la síntesis de HSP-70 y HSP-90.